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微生物的計數(shù)有哪些方法?

更新時間:2019-07-30      點(diǎn)擊次數(shù):4269
  血球計數(shù)板法:
 
  血球計數(shù)板是一種有特別結(jié)構(gòu)刻度和厚度的厚玻璃片,玻片上有四條溝和兩條嵴,中央有一短橫溝和兩個平臺,兩嵴的表比兩平臺的表面高0.1 mm,每個平臺上刻有不同規(guī)格的格網(wǎng),中央0.1 mm2面積上刻有400個小方格。通過油鏡觀察,統(tǒng)計必定大格內(nèi)微生物的數(shù)量,即可算出1毫升菌液中所含的菌體數(shù)。這種方法簡便,直觀,快捷,但只適宜于單細(xì)胞狀態(tài)的微生物或絲狀微生物所產(chǎn)生的孢子進(jìn)行計數(shù),并且所得結(jié)果是包括死細(xì)胞在內(nèi)的總菌數(shù)。
 
  液體稀釋法:
 
  對未知菌樣做連續(xù)十倍系列稀釋,根據(jù)估計數(shù),從*適宜的三個連續(xù)的10倍稀釋液中各取5毫升試樣,接種1毫升到3組共15只裝培養(yǎng)液的試管中,經(jīng)培養(yǎng)后記錄每個稀釋度出現(xiàn)生長的試管數(shù),然后查*大或然數(shù)表MPN(most probably number)得出菌樣的含菌數(shù),根據(jù)樣品稀釋倍數(shù)計算出活菌含量。該法常用于食品中微生物的檢測,例如飲用水和牛奶的微生物*。
 
  染色計數(shù)法:
 
  為了彌補(bǔ)一些微生物在油鏡下不易觀察計數(shù),而直接用血球計數(shù)板法又無法區(qū)分死細(xì)胞和活細(xì)胞的不足,人們發(fā)明了染色計數(shù)法。借助不同的染料對菌體進(jìn)行適當(dāng)?shù)娜旧?,可以更方便的在顯微鏡下進(jìn)行活菌計數(shù)。如酵母活細(xì)胞計數(shù)可用美藍(lán)染色液,染色后在顯微鏡下觀察,活細(xì)胞為無色,而死細(xì)胞為藍(lán)色。
 
  平板菌落計數(shù)法:
 
  這是一種*常用的活菌計數(shù)法。將待測菌液進(jìn)行梯度稀釋,取必定體積的稀釋菌液與合適的固體培養(yǎng)基在凝固前均勻混合,或?qū)⒕和坎加谝涯痰墓腆w培養(yǎng)基平板上。保溫培養(yǎng)后,用平板上出現(xiàn)的菌落數(shù)乘以菌液稀釋度,即可算出原菌液的含菌數(shù)。一般以直徑9cm的平板上出現(xiàn)50-500個菌落為宜。但方法比較麻煩,操作者需有熟練的技術(shù)。平板菌落計數(shù)法不僅可以得出菌液中活菌的含菌數(shù),而且同時將菌液中的**進(jìn)行了一次分離培養(yǎng),獲得了單克隆。
 
  比例計數(shù)法:
 
  將已知顆粒(如霉菌孢子或紅細(xì)胞)濃度的液體與一待測細(xì)胞濃度的菌液按必定比例均勻混合,在顯微鏡視野中數(shù)出各自的數(shù)目,即可得未知菌液的細(xì)胞濃度。這種計數(shù)方法比較粗放。并且需要配制已知顆粒濃度的懸液做標(biāo)準(zhǔn)。
 
  試劑紙法:
 
  在平板計數(shù)法的基礎(chǔ)上,發(fā)展了小型商品化產(chǎn)品以供快速計數(shù)用。形式有小型厚濾紙片,瓊脂片等。在濾紙和瓊脂片中吸有合適的培養(yǎng)基,其中加入活性指示劑2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC,無色)待蘸取測試菌液后置密封包裝袋中培養(yǎng)。短期培養(yǎng)后在濾紙上出現(xiàn)必定密度的玫瑰色微小菌落與標(biāo)準(zhǔn)紙色板上圖譜比較即可估算出樣品的含菌量。試劑紙法計數(shù)快捷準(zhǔn)確,相比而言避免了平板計數(shù)法的人為操作誤差。
 
  生理指標(biāo)法:
 
  微生物的生長伴隨著一系列生理指標(biāo)發(fā)生變化,例如酸堿度,發(fā)酵液中的含氮量,含糖量,產(chǎn)氣量等,與生長量相平行的生理指標(biāo)很多,它們可作為生長測定的相對值。
 
  膜過濾法:
 
  用特殊的濾膜過濾必定體積的含菌樣品,經(jīng)丫叮橙染色,在紫外顯微鏡下觀察細(xì)胞的熒光,活細(xì)胞會發(fā)橙色熒光,而死細(xì)胞則發(fā)綠色熒光。

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